Simpósio ASGCT

Protocolos clínicos de terapia gênica têm mostrado benefício no tratamento de uma variedade de doenças, incluindo imunodeficiências primárias, cegueira, hemofilia, hemoglobinopatias e câncer.  Pesquisadores da américa latina também estão avançando nos seus estudos nesta área. A Sociedade Americana de Terapia Gênica e Celular (ASGCT, American Society of Gene and Cell Therapy) reconhece este esforço e, através deste simpósio, promoverá uma oportunidade para intercambio entre pesquisadores nesta importante linha de pesquisa. Este evento contará com palestras de convidados internacionais e nacionais e também uma seção de pôsteres direcionada para trabalhos na área de terapia gênica e celular em geral, não só para doenças hematológicas. Resumos submetidos na categoria 'Simpósio ASGCT' serão exibidos em forma de painel (pôster) durante este evento no dia 07 de novembro, fornecendo uma oportunidade para os convidados e participantes se interagir, trocando idéias e experiências.
Tópico: Atualização dos estudos clínicos e de promissores estudos preclínicos em terapia genica e celular para doenças hereditárias e adquiridas.
Objetivo: Programa educacional no desenvolvimento de estudos que levaram ao sucesso o tratamento de doenças como leucemias/linfomas refratários, hemofilia, imunodeficiência hereditária e planos para mucopolissacaridoses. Estudos clínicos avançados no tratamento da Amaurose Congênita de Leber (cegueira congenital) com melhora da visão em pacientes pediátricos e adultos.
População Alvo: A natureza dos estudos translacionais e clínicos abrange uma grande população de interesse desde pesquisa básica a clínica assim como de estudantes a médicos e investigadores em diversas áreas.
Programa interativo: As palestras serão seguidas por uma sessão de pôsteres com o intuito de estimular a interação entres os vários investigadores e interessados na área de terapia gênica e celular.

  ASGCT Latin American Symposium
Quinta-feira, 7 de novembro 2013
8:30– 5:00
Centro de Convenções Ulysses Guimarães
Brasília, Brasil
 Título do Simpósio: Sucessos da Terapia Gênica na Prática Clínica: do câncer a doenças genéticas.
 
Presidente: Dr. Valder Arruda, PhD
Vice-presidente: Bryan Strauss. PhD
 

8:30– 8:40: Dr. Valder Arruda, PhD – Discurso de abertura e boas-vindas 8:40 am – 9:05 am: Dra Katherine Ponder Título: Vetores para Terapia gênica

Resumo da Apresentação:
A terapia gênica envolve a transferência de material genético que codifica um gene terapêutico nas células do corpo. A terapia gênica ex vivo envolve a remoção das células do corpo, modificação genética em cultura de tecidos e reinfusão no paciente, o que tem sido utilizado para modificar as células-tronco hematopoiéticas. A terapia gênica in vivo envolve a injeção de um gene em um vaso sanguíneo ou local, em um órgão ou tecido específico. A injeção intravenosa é eficiente na modificação de células do fígado por causa de seu excelente suprimento de sangue e o contato direto entre o sangue e hepatócitos, enquanto a injeção direta modifica células no olho e cérebro. Todas as abordagens de terapia gênica requerem um vetor, que é uma parte de material genético que produz um RNA mensageiro que codifica uma proteína terapêutica, ou codifica um siRNA que pode reduzir a expressão de um gene. Embora alguns vetores circulares sejam fita simples que podem ser produzidos em bactérias, o DNA livre de histonas não tem sido eficiente na transferência de material genético nas células. Em contraste, os vírus desenvolveram mecanismos eficientes para a transferência de informação genética nas células. Assim, a maioria dos ensaios de terapia gênica utiliza os chamados vetores virais que são capazes de transferir informação genética para uma célula, mas têm sido deficientes em impedi-los de se replicarem no organismo. Um exemplo simples de um vetor de terapia gênica é o vetor retroviral. Um retrovírus de tipo selvagem tem elementos que são necessários para envolver uma partícula viral e integra-la ao cromossomo, bem como sequências que codificam proteínas que são necessárias para produzir uma partícula viral, tal como os genes GAG, POL, e ENV. Um vetor retroviral pode ser gerado através da supressão dos genes que codificam as proteínas virais e substituindo-os por um gene terapêutico. Embora este vetor não possa replicar por si próprio, as partículas virais podem ser produzidas em células que contenham também os genes que codificam as proteínas virais. A clonagem de um gene terapêutico num vetor retroviral é simples, e uma transfecção em células de mamíferos que já contêm os genes de proteínas virais é simples. A cultura em larga escala pode produzir partículas virais, as quais podem, então, ser congeladas para uso posterior. Estes vetores ligam-se a um receptor da superfície da célula, que resulta na transferência da informação genética na célula, após o qual o RNA, que é o genoma do vetor retroviral é copiado no DNA através da transcriptase reversa, e integra-se no cromossomo e é mantido para a vida da célula. Existem muitos outros tipos de vetores virais que utilizam o mesmo princípio de exclusão de genes que codificam as proteínas virais, substituindo-os com o gene terapêutico, e produzindo-os em células que também expressam os genes para as proteínas virais. Outros vetores que são usados para a terapia gênica incluem vetores lentivirais (um subconjunto de vetores retrovirais), vírus (AAV), vetores de vírus associados a adenovírus e vetores adenovirais. As vantagens e desvantagens de diferentes vetores serão discutidas.


9:05– 9:15: Perguntas
9:15– 10:00: Dra Katherine Ponder


  Título da Apresentação: Terapia gênica para Doenças por Armazenamento dos Lisossomos 
Resumo:
Doenças por armazenamento de lisossomos (LSD) ocorrem devido à deficiência de enzimas que degradam uma variedade de compostos no lisossomo, e resultam na acumulação de material de armazenamento e os sintomas clínicos que variam de acordo com a doença específica. Hematologistas podem encontrar pacientes com doenças de armazenamento de lisossomos como doença de Gaucher ou mucopolissacarídeos (MPS), que são tratadas com terapia de reposição enzimática (TRE), ou pacientes com MPS, doença de Krabbe, ou outras LSDs que recebem transplante de células-tronco hematopoéticas. Três abordagens têm sido usadas para atingir a terapia gênica para as LSDs em seres humanos e/ou modelos animais. A terapia gênica dirigida com células-tronco hematopoiéticas ex vivo tem sido usada para tratar a adrenoleucodistrofia, e diminuiu, mas não eliminou a deterioração neurológica, enquanto a injeção direta no cérebro tem sido usada para tratar a MPS em modelos animais (2). Por fim, a injeção intravenosa de vetores tem sido usada para tratar a MPS em modelos animais, e o efeito clínico avaliado é até uma década. Esta palestra terá como foco o efeito da injeção intravenosa neonatal de um vetor retroviral no modelo canino de MPS VII, que ocorre devido à deficiência de b-glucuronidase e resulta em acúmulo dos glicosaminoglicanos heparan, dermatan e sulfato de condroitina (GUSB). Cães recém-nascidos MPS VII receberam por via intravenosa um vetor retroviral expressando GUSB canino, que resultou na transdução de células do fígado que segregaram GUSB que foi modificado com manose-6-fosfato, necessário para a absorção de enzima por células. Isto resultou na atividade de GUSB em soro que variou consideravelmente de quase normal a 100 vezes o normal, e manteve-se estável durante o tempo de vida dos cães. Cães MPS VII tratados tiveram uma sobrevida mediana de 6 anos, que foi de 20 vezes a dos cães não tratados em 0,3 anos. Um cão tratado sobreviveu 11 anos, enquanto os cães não tratados são, invariavelmente, mortos em 2 anos. Os cães tratados puderam caminhar ao longo de suas vidas devido à melhora óssea e doença articular, enquanto os cães não tratados não ficavam de pé depois de 6 meses de idade. Os cães tratados também tiveram melhorias em seu sistema cardiovascular. O efeito clínico foi similar em todos os animais, sugerindo que os níveis quase normais de enzimas no soro eram suficientes para exercer um efeito benéfico. No entanto, um dos 50 cães tratados desenvolveu um hemangioma benigno no baço que expressou sequências de vetor retroviral aos 8 anos de idade, e é provável que a mutagênese insercional desempenhou um papel na geração do tumor. Concluímos que a injeção intravenosa neonatal de um vetor retroviral que expressa GUSB resultou na expressão estável até 11 anos (o período de avaliação) e marcou a melhoria clínica significativa em cães MPS VII, mas o desenvolvimento de um tumor benigno expressando sequências de vetor retroviral aumenta as preocupações de segurança. Os estudos atuais tentam identificar um vetor com uma eficácia semelhante, que não tem a capacidade de ativar a expressão de oncogenes localizados próximo do local de integração do vetor. É provável que a terapia gênica sistêmica seja bem-sucedida para várias LSDs no futuro próximo, embora ensaios clínicos não tenham sido iniciados.

10:00 – 10:10: Perguntas
10:10 am – 10:55 am: Dr Adrian Thrasher, PhD
 

Título da Apresentação: As abordagens de terapia gênica para Imunodeficiências Primárias

Resumo:
No início da década de 1990, os primeiros ensaios clínicos de terapia gênica foram utilizados em uma Imunodeficiência combinada grave (SCID), causada por uma deficiência da enzima intracelular de adenosina deaminase. Na ausência de tratamento definitivo, a SCID de qualquer tipo molecular é normalmente fatal nos primeiros anos de vida, embora os pacientes com deficiência de ADA possam ser amparados pela administração de substituição de enzimas exógenas. Mesmo assim, esta é muitas vezes apenas parcialmente eficaz, e extremamente cara. A base lógica para o desenvolvimento da terapia gênica para SCID, por conseguinte, deriva da gravidade da doença, da inadequação da terapia convencional, e da morbidade e mortalidade considerável associadas com o transplante de células-tronco, em especial a partir de um doador incompatível. A eficácia nestes primeiros estudos foi limitada, mas a partir de uma década, a tecnologia de transferência genética e protocolos de manipulação de células tem sido suficientemente refinada para produzir o benefício clínico real. Quatro estudos recentes demonstraram a terapia gênica altamente eficaz para a forma ligada ao cromossomo X de SCID (SCID-X1) e deficiência de ADA, usando retrovírus para inserir os genes terapêuticos em células-tronco hematopoiéticas ex vivo (dois exemplos do nosso próprio centro estão abaixo referenciado). Estudos semelhantes de  "princípio de prova" têm sido realizados em pacientes com Doença Granulomatosa crônica e Síndrome de Wiskott-Aldrich. Tendo em conta os resultados e os efeitos adversos da terapia convencional, estes são resultados notáveis e a primeira indicação clara de que a terapia gênica pode oferecer uma cura para algumas doenças humanas. Em alguns pacientes, o tratamento falhou, o que indica que há mais que se aprender sobre a dose eficaz de células corrigidas e do potencial de fatores do hospedeiro para influenciar o desenvolvimento de células imunes.
Muitos tipos diferentes de vetores foram testados em experimentos laboratoriais para inserir genes terapêuticos, e a eficácia é altamente determinada pelo hospedeiro e tipo de tecido. Para a transferência de gene estável para células em divisão, tais como células hematopoéticas, o novo material genético tem que ser mantido através da divisão celular e passado para as células filhas. Embora os retrovírus sejam altamente eficazes para isso, sua dependência da integração cromossômica traz consigo o risco de ativação indesejada ou inativação do gene. Tendo inicialmente alcançado sucesso na reconstituição imunológica, vários pacientes com SCID-X1 (de um total de 19 tratados em todo o mundo) desenvolveram doença linfoproliferativa de células T até 6 anos após o procedimento de terapia gênica. Em quatro destes pacientes, as sequências potenciadoras do vetor retroviral, que são responsáveis pela expressão do transgene eficaz, havia ativado o proto-oncogene LMO-2. É provável que sejam outros fatores que contribuam para a transformação das células, mas ainda não foram definidos. Por conseguinte, não está claro se todos os pacientes estão em risco significativo, ou se este é mais pronunciado em alguns com SCID-X1. Contudo, os relatos de eventos adversos semelhantes em outras aplicações, uma vez mais, no contexto de geração de vetores gammaretrovirus precoce, indicam que esta tecnologia requer refinamento considerável.
Felizmente, é provável que muito pode ser feito para melhorar a eficiência e a segurança dos protocolos atuais, e esses desenvolvimentos que entraram recentemente em testes clínicos. A concepção de vetores utilizados para a inserção de genes é claramente importante, e as modificações que limitam os riscos de mutagênese são possíveis, tais como incorporação de sequências isoladoras de DNA e RNA em vetores de integração, uso de vetores capazes de se inativar em que as poderosas sequências potenciadoras virais são suprimidas ou direcionados das regiões seguras no genoma. Finalmente, o desenvolvimento de recombinação homóloga ou de reparação do gene para corrigir mutações genéticas com precisão, ou a construção de vetores extracromossômicos estáveis mitoticamente evitaria muitos destes problemas, embora as tecnologias atuais sejam ineficazes.
10:55 am – 11:05 am: Perguntas
11:05 am – 11:50 am: Dr Michael Milone, PhD 

Título da Apresentação: Construindo imunidade sobrenatural ao câncer utilizando receptores de antígeno quimérico
Resumo da Apresentação:
O sistema imune possui importante potencial citotóxico. O estímulo natural da imunidade através de vacinas tem mostrado efeitos promissores em alguns cânceres; entretanto, algumas barreiras limitam a eficácia do sistema imune natural, incluindo a tolerância a auto-antígenos e imunodeficiência associada a câncer e quimioterapia. A imunoterapia adotiva usando células T que são geneticamente modificadas para expressar um receptor artificial, combina a especificidade do antígeno de um anticorpo com o sinal de transdução de maquinaria de receptor de células T em um único receptor de antígeno quimérico - CAR, uma promessa significativa para superar muitas barreiras à imunidade anticâncer. Esta palestra irá descrever a concepção e produção de células-T que sustentam os CARs que visam CD19, uma molécula expressada por células B normais e células em uma variedade de tumores de células B, incluindo leucemia linfoblástica aguda (LLA) e leucemia linfocítica crônica (LLC). O uso de vetores lentivirais para a geração eficiente de células T CAR modificadas anti-CD19 (CART19) será analisado. O restante da palestra com o foco sobre a aplicação das células T CAR modificadas no tratamento de tumores de células beta. Os resultados da fase I de ensaios clínicos na instituição do palestrante utilizando CTL019 (ClinicalTrials.gov Identificadores: NCT01626495, NCT01747486) e ensaios em outras instituições serão apresentados. A toxicidade relacionada com a terapia celular de CART19 que inclui uma síndrome que libera citocinas frequente e aplasia de células beta a longo prazo também serão discutidos.

11:50 am – 12:00 pm: Perguntas
12:00 pm – 1:00 pm: Pausa do Almoço
1:00 pm – 1:45 pm: Valder Arruda, MD, PhD
 

Título da Apresentação: Terapia gênica para Hemofilia: progresso e desafios
Resumo da Apresentação:
Ao longo da última década, um antigo objetivo da terapia gênica para a hemofilia foi idealizado pela caracterização dos genes FVIII e FIX, e pela disponibilidade de grandes modelos animais da doença em estudos pré-clínicos críticos. A otimização de sistemas de expressão de vetor viral recombinante bem como a produção de vetor permitem o início de ensaios clínicos. A utilização de vetores virais adeno-associados (AAV) para a expressão de FIX resultou na expressão de níveis terapêuticos do transgene. Os recentes avanços no campo levou à expressão sustentada de sucesso a longo prazo de níveis terapêuticos de FIX com consequente melhoria de fenótipos graves a moderados/leves de indivíduos com hemofilia B. Estes resultados levantam a possibilidade de que uma abordagem semelhante para a hemofilia A possa ser vislumbrada com o desenvolvimento contínuo de novas estratégias promissoras para a expressão do FVIII.

1:45 pm – 1:55 pm: Perguntas
1:55 pm – 2:40 pm: Jean Bennett, MD, PhD


  Título da Apresentação: A retina como alvo para a terapia gênica: Progresso e Panorama
Resumo da Apresentação


Jean Bennett MD, PhD A terapia gênica tem restaurado a visão em pacientes com amaurose congênita de Leber (ACL), uma cegueira hereditária que tem início no nascimento. Esta apresentação irá descrever os resultados de segurança e eficácia após a terapia gênica em 12 indivíduos, nascidos com ACL. Os indivíduos foram tratados no Hospital Infantil da Filadélfia em um olho e todos os indivíduos elegíveis tiveram re-administração no olho contralateral. A apresentação também irá descrever como estes dados foram utilizados para iniciar um estudo de Fase 3 visando obter aprovação da Food and Drug Administration desta intervenção. Enquanto a ACL é uma doença rara de cegueira, os resultados desses estudos poderiam proporcionar o desenvolvimento de outros tratamentos à base de gene para formas mais comuns de cegueira e outras doenças hereditárias.

2:40 pm – 2:50 pm: Perguntas
2:50 pm – 3:00 pm: Mesa-redonda e perguntas para os palestrantes
3:00 pm – 5:30 pm: Sessão de Poster